BIACORE生物大分子相互作用仪

2018-01-22

会见量：

BIA（Biomolecular Interaction Analysis）提供了实时视察生物分子间相互作用的手艺。通过它能视察两种分子连系的特异性，能知道两种分子的连系有多强，还能相识生物分子的连系历程共有几多个协同者和加入者。BIA可以让获得用其他手艺要领难以获得的效果，由于它可以实时反应分子连系历程中每一秒转变的情形。无需借助标记物举行剖析使BIA普遍应用于种种生物系统的测定，从种种小分子化合物、多肽、卵白质、寡核苷酸和寡聚糖直至类脂、噬菌体、病毒和细胞。BIA就是使用金属薄膜外貌的折射率的改变，引起共振角的转变，来推断金属薄膜外貌的转变。实验时先将一种生物分子牢靠在传感器芯片外貌，将与之相互作用的分子溶于溶液流过芯片外貌。检测器能跟踪检测溶液中的分子与芯片外貌分子的连系、解离整个历程的转变。

BIA手艺是基于一种外貌等离子共振（SPR）的物理光学征象的生物传感剖析手艺。不必使用荧光标记和同位素标记，从而坚持了生物分子的自然活性。当入射光以临界角入射到两种差别透明介质的界面时将爆发全反射，且反射光强度在各个角度上都应相同，但若在介质外貌镀上一层金属薄膜后，由于入射光可以引起金属中自由电子的共振，从而导致反射光在一定的角度内大大削弱，其中使反射光完全消逝的角度称为共振角。共振角会随金属薄膜外貌通过的液相的折射率的改变而改变，折射率的转变（RU）又和连系在金属外貌的大分子质量成正比。因此，BIA手艺可以通过对反应全历程中种种分子反射光的吸收获得初始的数据，并经相关处置惩罚获得效果－传感图。

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仪器先容

BIA是英语"Biomolecular Interaction Analysis"的缩写，Biacore提供了实时视察生物分子间相互作用的手艺。通过它您能视察两种分子连系的特异性，能知道两种分子的连系有多强，还能相识生物分子的连系历程共有几多个协同者和加入者。Biacore可以让您获得用其他手艺要领难以获得的效果，由于它可以实时反应分子连系历程中每一秒转变的情形。无需借助标记物举行剖析使Biacore普遍应用于种种生物系统的测定，从种种小分子化合物、多肽、卵白质、寡核苷酸和寡聚糖直至类脂、噬菌体、病毒和细胞。Biacore是一个通用的仪器，由于您可以恣意偶连如上所述任一种生物分子到传感片外貌。因此要将Biacore应用在哪个领域，由您决议!

Biacore是基于外貌等离子共振(SPR)手艺来实时跟踪生物分子间的相互作用，而不必任何标记物。实验时先将一种生物分子牢靠在传感器芯片外貌，将与之相互作用的分子溶于溶液流过芯片外貌。检测器能跟踪检测溶液中的分子与芯片外貌的分子连系、解离整个历程的转变。

Biacore系统的3个焦点部分是传感器芯片，SPR光学检测系统，微射流卡盘。

应用规模

1. 卵白质功效剖析与卵白判断
2. 分子交互作用特征表征
3. 鉴定潜力药物标靶与诊断生物标记物
4. 细胞讯息转达机制探讨
5. 卵白质结构与功效关系剖析
6. 癌症、免疫调理、细胞干枯机制及分子医学研究
7. 分子浓度测定
8. 连系位点图谱
9. 卵白质体研究
10. 疫苗研发
11. 品管检测
12. 新药开发

性能说明：

1.BIAcore生物分子相互作用剖析系统是用在探测分子间相互作用的生物感测器，此手艺可在不需任何标定物的真实状态下监视卵白质、核酸、小分子药物、糖类等任何两种生物分子间相互连系、解离的情形。使用外貌共振角度之原理，当偏极光照射到分子外貌的时间即可侦测到外貌共振角度的差别。

2. 焦点手艺简介：

不需任何标定物的剖析要领（Label-free analysis）：BIAcore使用外貌电浆共振(Surface Plasma Resonance,SPR）的光学原理，直接侦测反应外貌上生物分子因相互作用连系解离导致的质量改变，不需先做反应分子纯化、及标定的繁杂程序。
自订的生物特异性的反应外貌（Biospecific surface）：具备多种反应片（Sensor Chips）以及熟练的外貌牢靠要领（Surface Immobilization Methodology）使用者可针对反应分子种类选择适当的反应片，再使用系统内建的外貌牢靠程式，製备特定的生物特异性的连系外貌。
超微量样品需求：BIAcore使用奇异设计的超微量液体汇流卡所需样品体积少少（在5-100 μl）同时能准确的控制反应组成的接触时间与流速。
快速剖析（Short analysis time）：反应时间为2至10分钟。
高迅速度之侦测（High sensitivity detection）：迅速度依待测物之分子量而异，待测物分子量大于2000 Dalton，迅速度高达10^-9 - 10^-12 M。
同步侦测两个流路（Flow cell）：BIACORE X的 IFC内具有两个反应槽，可做即时配景扣除（on-line background）

操作流程

1. 样品准备 样品包括耦联到芯片外貌的分子（ligand）和在溶液中流过的样品，称作analyte。若是ligand是小分子，要检查该分子结构上是否有可供耦联的氨基基团，若是没有需要思量对分子举行修饰。
2. 缓冲液准备
该实验要求所有缓冲液都经由过滤和脱气处置惩罚。若是缓冲液能够耐受高温的话，可以对缓冲液举行灭菌处置惩罚。这样灭菌有脱气的效果，同时也能生涯更长的时间。
3. 耦联参照耦联的详细要领。
由于芯片外貌带有负电，因此要耦联到芯片上的分子必需带上正电，才有利于分子吸附到芯片外貌，以利于共价耦联反应的完成。预连系实验就是将样品消融在差别PH值的缓冲液中，使其带上差别量的电荷。然后，将样品流过芯片外貌，视察它与芯片的连系曲线，就可判断出合适的条件。
4. 测试
将剖析物用合适的缓冲液稀释处置惩罚，上样。要尽可能让样品缓冲液与系统载流缓冲液一致。
5. 再生

再生是指将连系到芯片外貌的剖析物洗脱，以便芯片的重复使用。

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