- 近年来，抗体类药物（如单抗、双抗、ADC等）生长迅速，在多个疾病研究领域均有重磅产品陆续上市，抗体药物研发受到越来越多的关注。尊龙凯时在抗体药物的一站式研发效劳计划制订中与客户深入交流，将每一个案例的特点与多年实战履历和手艺积累相连系，审慎地将优质实验计划与效果交到客户手上。尊龙凯时可以提供抗体全流程效劳，包括：药物发明、CMC研究效劳、切合GLP规范的综合性临床前研究效劳（药效学研究、药代动力学评价和清静性评价等）；以合规、高效、高质的效劳助力客户产品顺遂获批等。
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Overview of the natural function of antibodies[1]
01 抗体药物开发
- 尊龙凯时抗体发明效劳平台汇聚了多样化的先进手艺——杂交瘤手艺、单B细胞手艺、抗药物抗体制备手艺等，为全球客户提供了高效、精准的抗体研发解决计划。1 杂交瘤手艺依托超10年的定制化抗体生产履历和专业的抗体药物研发团队，尊龙凯时杂交瘤研发效劳可提供多种免疫要领（卵白、多肽、小分子化合物、全细胞），知足客户的多样化需求。具有10年以上的定制化抗体生产履历，以及履历富厚的抗体药物研发团队，尊龙凯时建设了抗体药物开发平台。尊龙凯时杂交瘤研发效劳可提供多种免疫要领（卵白、多肽、小分子、全细胞），确保知足客户需求。
用于先导化合物识别的杂交瘤手艺:抗原的制备免疫接种和检测滴度 6-8周 亚克隆的融合筛�。‥LISA、FACS连系和阻断试验、功效试验） 4-6周抗体测序 2周案例：Nectin-4抗体发明ELISA连系试验数据
基于流式细胞术的细胞连系试验数据
- 2 单B细胞抗体制备尊龙凯时提供单B细胞抗体制备手艺效劳，包括单B细胞分选和单B细胞Ig基因转录、扩增、测序等。单B细胞抗体制备手艺是现在新型、高效的抗体发明要领之一，具有速率快、通量高、以及抗体重轻链可变区自然配对的优势。
单B细胞抗体制备流程
案例：通过单B手艺判断Nectin-4抗体
尊龙凯时通过其抗体发明平台，乐成为客户筛选并判断了针对Nectin-4的特异性抗体。ELISA连系实验和流式细胞术细胞连系实验数据均批注，这些抗体具有优异的连系活性和特异性。
尊龙凯时案例
Nectin-4 Mouse Serum Titer
Nectin-4 (4-1) Sorting Single B Cell
Nectin-4 (4-6) Sorting Single B Cell
- 3 抗药物抗体制备高迅速度及多样性的多克隆抗药物抗体可作为免疫原性研究中的阳性参照物，模拟ADA在人体中爆发的情形，同时也可以特异性检测体内抗体药水平，是药代动力学研究的主要试剂。因此，抗药物抗体作为抗体药物研发必备工具试剂，其不但是临床申报必不可少的试剂之一，在临床阶段也有十分普遍的应用。尊龙凯时在ADA开发方面具有富厚的履历，已乐成交付了100多份订单，可提供高亲和力和特异性的多克隆抗药物抗体开发效劳，效劳周期短，开发本钱低。尊龙凯时案例一
血清效价
纯化后抗体效价
尊龙凯时案例二：ADC药物
血清滴度
ADA滴度
- 4 纳米抗体制备纳米抗体诸多方面均优于古板抗体�；谕湛贫镏亓纯固宓腣HH单域抗体的特殊结构，兼具古板抗体与小分子药物的优势，险些完善战胜了古板抗体的开发周期长，稳固性较低，生涯条件苛刻等缺陷，逐渐成为新一代治疗性生物医药与临床诊断试剂中的新兴实力。相比于通例抗体，纳米抗体的优势有：分子量小，可穿透血脑屏障；原核或真核系统中高表达；特异性强，亲和力高；对人的免疫原性弱等。尊龙凯时生物提供驼科动物VHH抗体文库构建效劳，包括抗原的制备，免疫，抗体文库菌的构建以及纳米抗体的淘选，ELISA验证等相关实验。
Nanobody production scheme using a phage display library[3]
02 抗体药物体外研究
- 抗体类药物的活性测定是指对药物的有用因素、含量及药物效价举行测定，在药物研发及质量控制中至关主要，是探索药物作用机制（MOA），提供药物IND申报依据的主要手段� ？固逡┪镌谟肫涮囟ò械懔岛�，通过激活或阻断细胞因子等信号传导、补系一切活化及细胞杀伤等生物学作用施展治疗效果。随着药物高通量筛选平台的一直建设与生产规模的一直放大，基于细胞系的体外剖析要领，例如依据药物作用机制构建的报告基因细胞株更是因迅速度高，检测周期短，重复性好且操作简朴而被普遍应用于新药开发的历程中。体外药理药效剖析需要凭证抗体特点，靶点特征来设计响应实验，剖析要领主要包括基于流式、细胞成像的细胞剖析；基于ELISA，Luminex等可溶性卵白的剖析。
- 1 连系实验 Binding assay (FACS, ELISA, SPR)
Dose-dependent binding of Inetetamab (anti-HER2) with HCC1954 cells were tested through FACS, the data showed that Inetetamab binds with HCC1954 cells with EC50 of 6.4 nM.
Dose-dependent binding of Inetetamab (anti-HER2) with human HER2 protein were tested through ELISA, the data showed that Inetetamab binds with HER2 protein with EC50 of 97 nM.已验证的靶点：PD-1, PD-L1, VEGF, Nectin1, Nectin2, Nectin3, Nectin4, NECL1, NECL2, NECL3, NECL4, NECL5, EPHA1, EPHA2,EPHA3, EPHA4, EPHA5, INSR, IGF-1R, HSA, FcRN, FcRI, FcRII, FcRIII, C1q, Factor B, HER2, Transferrin, EPCR, STAT3, STAT5,STAT1, 4-1BB, SHP2, ATIII, EGFR, gp1等。
Eylea binding with hVEGF
BEOVU binding with hVEGF
BB-1701 binding with hHER2
DS8201 binding with hHER2 - 2 抗体的功效性实验
Raji cells were mixed with human PBMCs, and different doses of Rituximab was added to induce ADCC, the killing of raji cells were detected through FACS(CFSE labeling of raji).
Raji cells were mixed with human AB serum, and different doses of Rituximab was added to induce CDC, the killing of raji cells were detected through FACS(PI staining of raji).
B cells were treated with Teliacicept and induced with Baff for 72 hours, H3-thymidine incorporation were analyzed through scintillation counting.
T cells were treated with compound A and induced with ICOSL for 72 hours, H3-thymidine incorporation were analyzed through scintillation counting. - 3 细胞因子释放实验使用抗体A/IgG1和抗CD3/LPS处置惩罚人PBMC细胞25小时（液相或固相），通过Luminex试剂盒剖析TNFα水平. 凭证ICH指导原则测定细胞因子释放，其中必需测试的因子有IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ和TNF-α。使用受试抗体处置惩罚PBMC细胞，至少测试3种。受试抗体的泛起形式包括固相和液相。ELISA、Luminex、CBA 和 MSD 要领可用于检测细胞因子。 OKT3用作阳性比照。该测定的目的是评估潜在的抗体诱导细胞因子释放效应，以避免临床试验中爆发强细胞因子释放风暴。
03 抗体药物的CMC研究
- 尊龙凯时可提供抗体药物工艺开发和制剂研发效劳。在确保研发质量的基础上，尊龙凯时团队通过严谨的试验计划设计（DOE）、专业化的研发手艺、标准化的项目治理、规范化的试验操作、高效的多方相同，一连助力客户的抗体药物研发。
- 洛启生物LQ036——重组抗IL-4Rα单域抗体雾化液2022年2月，洛启生物LQ036——重组抗IL-4Rα单域抗体雾化液(毕赤酵母)的IND正式获得CDE批准。LQ036是一款针对中重度哮喘治疗的吸入式纳米抗体药物。在LQ036的研发历程中，尊龙凯时依托其吸入制剂研发平台，参考海内外吸入制剂的指导原则并连系各国申报要求，为LQ036制订专门的吸入制剂吸入特征指标研究计划，协助LQ036顺遂完成了中国NMPA和澳洲TGA申报质料的准备，并乐成获批。
04 抗体药物药效学评价
- 抗体的动物体内药效试验是抗体药物研究中一项主要的药理参数，直接反应了抗体的功效并影响临床试验设计。尊龙凯时致力于为客户提供成熟的评估抗体体内药效的肿瘤模子，在AAALAC认证的情形下完成模子动物的建模和饲养，并以GLP-like的高标准完成相关药效学评价试验。尊龙凯时多年来深耕动物领域，为药物研发提供合适的动物模子，可提供多种用于评估抗体药物的肿瘤模子（包括PDXO模子）及非肿瘤模子，在AAALAC认证的情形下完成模子动物的建模和饲养，并以GLP-like的高标准完成相关药效学评价试验。多种实验动物：啮齿类：小鼠/大鼠、兔子非啮齿类：比格犬、小型猪、非人灵长类动物尊龙凯时案例: CD3+ Bispecific Antibody
尊龙凯时案例: CD3+ Bispecific Antibody
05 抗体药物药代动力学评价
- 尊龙凯时在抗体药物体内剖析中可提供多种测检测要领，通太过析动物体内收罗的血浆/血清样本，为客户提供可靠优质的PK数据。尊龙凯时案例: Pharmacokinetics of YYB-101 in cynomolgus monkeys在四只雄性食蟹猴中单次静脉注射 YYB-101（剂量为10 mg/kg）后，研究其药代动力学特征。血清Tmax为2 h，Cmax为221.57 μg/mL，AUC(0–∞)为94 802.96 μg/mL*h。 t1/2Z 约为 21.7 天，扫除率为 0.11 mL/kg/h。这项实验是通过尊龙凯时举行的。
Pharmacokinetic profile of YYB-101 in cynomolgus monkeys[4]
尊龙凯时案例：Anti-drug antibodies of YYB-101 in cynomolgus monkeys在天天服用YYB-101（剂量为 50mg/kg ）的第一天，在一只雌性猴子中检测到抗药物抗体，但在第 29 或 85 天从该动物网络的样本中未检测到抗药物抗体。仅在 1 只动物中检测到抗药物抗体。简单时间点，险些没有视察到与正常组织的交织反应。 这项研究通过尊龙凯时举行�；谡庑┬Ч�，一项针对晚期实体瘤患者的 I 期临床研究正在举行中 (NCT02499224)。
06 抗体药物清静性评价
- 尊龙凯时毒理研究部遵照ICH指导原则S6和S9，连系每一个项目的详细情形定制个性化的清静性评价计划，提供切合NMPA、FDA、OECD、TGA等国际GLP标准的清静性评价效劳，包括单次和重复给药毒性试验（陪同毒代动力学研究) 清静药理（包括组织交织反应）免疫原性检测
- 尊龙凯时案例1: Toxicokinetics of YYB-101 in cynomolgus monkeys静脉注射YYB-101后，YYB-101的平均全身袒露量（AUC0-168h）和Cmax值随剂量成比例增添。在每周输注 YYB-101 四次后，YYB-101 的平均血清峰浓度和谷浓度趋于稳态。最后一次给药后 63 天，康复动物的血清浓度可量化（第 22 天起约为 Cmax 的 2.8%）。重复静脉注射YYB-101后，全身袒露量（AUC0-168h）增添，累积率为2.38至2.95。这项研究通过尊龙凯时举行的。
Toxicokinetic parameters on days 1 and 22 following intravenous infusion of YYB-101 at 10, 50, or 200 mg/kg perday in cynomolgus monkeys[4]
尊龙凯时部分助力抗体项目案例
- BAT6021注射液和BAT6005注射液2021年9月，百奥泰BAT6021注射液和BAT6005注射液立异药接连获批临床，在肿瘤治疗领域取得新希望。BAT6021和BAT6005是百奥泰开发的抗TIGIT单克隆抗体，用于肿瘤治疗。作为恒久相助同伴，尊龙凯时先后为百奥泰立异药BAT6021、BAT6005提供（包括药代和清静性评价在内的）综合性临床前研究效劳，为百奥泰新药项目的临床获批助力。
- BAT7104注射液2021年10月，百奥泰PD-L1/CD47双抗BAT7104注射液获临床试验默示允许，本次获批的顺应症为晚期恶性肿瘤。BAT7104是靶向PD-L1/CD47的双特异性抗体药物，旨在抑制PD-1/PD-L1和CD47/SIRP-α途径。尊龙凯时作为百奥泰恒久相助同伴，有幸在BAT7104注射液的研发中与百奥泰相助，在GLP的实验室情形和操作规范下，完成了BAT7104注射液的（包括药代动力学和清静性评价在内的）综合性临床前研究效劳，为BAT7104注射液高效、高质的获批临床提供了专业包管。
- JYB19042022年5月，济民可信旗下子公司江苏济烨生物制药有限公司lgE抗体药物JYB1904注射液获批临床。JYB1904是一款新型抗IgE重组人源化单克隆抗体靶向治疗药物。JYB1904注射液具有优良的临床治疗潜力，可为中重度哮喘等过敏性疾病的临床治疗提供潜在的新计划。尊龙凯时为该药提供了切合GLP规范的（包括药代和清静性评价在内的）综合性临床前研究效劳，在攻坚克难中赋能JYB1904项目乐成 获批。
- CC3122022年6月，惠和生物首个靶向CD19/CD3/CD28三特异性抗体CC312的IND申请获得FDA默示允许，这是海内首个、全球第三个基于CD28 共刺激信号进入临床研发阶段的三特异性抗体，CC312在针对血液瘤的临床前研究中体现出显著的药效学作用及优异的清静性。在本次获批中，尊龙凯时为CC312提供了切合GLP规范的（包括药代和清静性评价在内的）综合性临床前研究效劳，以合规、高效、高质的服 务助力其顺遂获批。
- BAT20222022年6月， 百奥泰注射用BAT2022获得临床试验批准。注射用BAT2022是百奥泰自主研发的双特异性中和抗体，拟用于治疗由于新冠病毒及其突变株熏染引起的新冠肺炎。在注射用BAT2022的临床前研发中，尊龙凯时依托富厚的项目履历和扎实的专业基础，在极短时间内向百奥泰呈递了完整的试验计划。最终在GLP的实验室情形和操作规范下，完成了注射用BAT2022的清静性评价研究效劳，以合规、高效、高质的效劳助力其乐成获批临床，为注射用BAT2022的快速获批临床提供了专业包管。
- GT900082022年10月，开拓药业PD-L1/TGF-β双靶点抗体(GT90008)获批临床。GT90008是一款PD-L1/TGF-β双靶点抗体，可以同时抑制PD-L1和TGF-βR2的高度活性，具有成为同类最佳药物的潜力。在GT90008的研发中，尊龙凯时依托卵白质/抗体药代动力学研究平台和生物手艺药物非人灵长类清静评价手艺效劳平台，提供了切合GLP规范的（包括药代和清静性评价在内的）和药代的综合性临床前研究效劳，整个 项目的研发希望顺遂且高效。
- HCW92182022年10月，HCW Biologics Inc.融合卵白复合物HCW9218获FDA批准举行癌症治疗试验。HCW9218是一种异源二聚体、双功效融合卵白复合物，包括TGF-β受体II的细胞外结构域和IL-15/IL-15受体α复合物，能有用激活和增殖NK细胞和CD8+ T细胞，增强细胞对肿瘤靶标的细胞毒性，优化化疗的疗效并镌汰化疗副作用。尊龙凯时作为HCW的相助同伴，在GLP的实验室情形和操作规范下，建设了适用于HCW9218的剖析要领，提供了临床前药代和安评研究，全力促成该项目的高质高效完成。别的，尊龙凯时临床前药理及毒理研究团队依托在软件、手艺、规范、素质等各方面周全成熟的SEND数据转换平台，助力HCW9218乐成申报FDA，推动其进入临床试验阶段。
- NB0022023年7月，逻晟生物NB002顺遂通过FDA审查并赞成开展Ⅰ期临床试验。NB002是一款靶向TIM-3奇异表位的单克隆治疗抗体，具有显著的单药抗肿瘤的治疗效果，其不但显著激活T和NK细胞的活性，增强其对抗肿瘤的能力，更主要的是NB002重修了肿瘤情形中被抑制的自然免疫，恢复DC细胞反应能力，提高髓系细胞抗原递呈功效，整体性扫除TIM-3调控的从自然免疫到获得免疫的抑制性作用，有用地增 强肿瘤免疫杀伤能力。尊龙凯时作为逻晟生物的相助同伴，为NB002提供了清静性评价、药代动力学等临床前研究效劳，助力其IND申请顺遂获FDA临床允许。
- 参考文献：[1] Ivana Spasevska. An outlook on bispecific antibodies: Methods of production and therapeutic benefits.
[2] Abdullah F U H Saeed, et al. Antibody Engineering for Pursuing a Healthier Future. Front Microbiol. 2017 Mar 28;8:495. doi: 10.3389/fmicb.2017.00495.
[3] MA Lin-lin, et al. Construction and screening of phage display library for TIM-3 nanobody. Acta Pharmaceutica Sinica 2018, 53 (3): 388-395.
[4] Hyori Kim, et al. Preclinical development of a humanized neutralizing antibody targeting HGF. Exp Mol Med. 2017 Mar 24;49(3):e309. doi: 10.1038/emm.2017.21.
