中国科研事情者对抗体试剂问题的反思
2015年5月19日 Nature杂志从美国和加拿大几位资深科学家的亲自履历 ，深度叙述了现在抗体试剂的现状与问题 ，给全天下科研事情者敲响了警钟 。身为中国科研事情者 ，我们遇到的抗体试剂问题只怕比外洋偕行来得更多 ，当下除了诉苦 ，我们更应深刻反思：怎样才华获得高质量、合适的抗体试剂 。
获得高质量、合适的抗体试剂也并训斥事 ，我们需要在以下三个方面加以甄别：1.优异的抗体供应商；2.过硬的冷链物流系统；3.正规的销售（直销/分销）渠道 。
1. 优异的抗体供应商
优异的抗体供应商应具备以下条件或者能为客户提供以下信息：抗原序列选择、抗体纯化方法、抗体验证数据、应用指南 。
i. 抗原序列选择
抗原序列选择至关主要 ，直接决议了抗体的特异性/低交织反应和抗体产量 ，因此抗原序列选择不但要包管全基因组内同源序列最低 ，同时还要扫除信号肽和卵白跨膜区序列 。
ii. 抗体纯化
抗体纯化现在主流的三种方法划分是：盐析法粗纯、Protein A/G通用型纯化和特异抗原纯化柱 ，三种方法的纯化效果和抗体效价依次提高 。其中Protein A/G通用型纯化的效果和本钱适中 ，现在大部分抗体试剂公司都接纳该方法举行大规�？固迳� 。要想获得较高质量的抗体 ，需要通过特异抗原纯化柱 ，但由于涉及牢靠特异抗原等操作 ，成内情应是最高的 ，然而 ，使用该要领纯化出来的抗体纯度和特异性最高 。
iii. 抗体验证数据
现在许多供应商都有抗体验证数据 ，但我们并不知道这些验证数据的详细泉源 。许多抗体都有WB验证数据 ，但很少有供应商标明WB是在哪些细胞系内验证 ，若是是过表达的细胞系 ，那WB验证意义就不大了 。同样 ，免疫组化或免疫荧光也保存类似问题 ，验证的数据详细泉源于哪种组织、哪种病理样本鲜有提及 。而泉源差别 ，实验效果会千差万别 。供应商往往用一种最容易获得实验室数据的样本做实验 ，但这样的抗体用到我们自己的实验时 ，往往会有多种问题泛起 。
iv. 应用指南
抗体供应商一样平常会凭证验证数据推荐相关的应用 ，以是验证数据关于应用有决议性作用 。应该特殊注重 ，统一支抗体可以做WB ，却并纷歧定适合于免疫荧光或免疫组化 ，反之亦然 。因此 ，供应商的抗体验证数据就显得很是主要了 。
以上列出了优异抗体供应商的4条硬性要求 ，现实中有哪些能很好地做到以上几点呢？下面以Sigma-Aldrich提供的HPA金标抗体为例 。HPA金标抗体由Human Protein Atlas (HPA)Project设计并验证 。
1）HPA金标抗体抗原选择
HPA金标抗体的免疫抗原是重组人卵白表位识别标签(PrESTs) ，表位识别标签一样平常含有50-150个氨基酸 。表位识别标签经由设计和筛选 ，使得它们含有奇异的表位 ，并且适合引发高特异性的抗体爆发 。通过对人全基因组扫描的方法 ，确保用于生产抗体的卵白表位识别标签与其它卵白有最低的同源性 。同时 ，抗原表位还会扫除信号肽和卵白跨膜区 。
2）HPA金标抗体亲和层析纯化
HPA金标抗体通过亲和层析方法举行纯化(以PrESTs抗原作为配基 ，特异抗原纯化柱) ，接纳三步法免疫层析的纯化工艺：HisABP特异性标签去除 ，PrESTs特异性捕获 ，最后通过排阻色谱举行缓冲液的交流 ，不但包管了抗体的纯度 ，同时有利于抗体恒久生涯 。
3）HPA金标抗体验证
每一支HPA金标抗体都经由卵白芯片、免疫组化、WB和免疫荧光的实验验证 ，验证的数据量不但重大--每支抗体凌驾700张实验验证图片（病理学家认证并注释）在线盘问 ，并且 ，验证数据是来自于差别组织和细胞系样本 ，还会连系参考文献以及生物信息学展望 ，确保每一个实验数据的可靠性 。
4）HPA金标抗体应用指南
HPA金标抗体主要以免疫组化/免疫荧光为主 ，大部分抗体同时支持WB实验 �；诙嘀肿橹蛘呦赴难橹ばЧ� ，给宽大科研事情者提供了名贵的数据参考 。
综上 ，HPA金标抗体可称得上是优质抗体规范 ，而Sigma-Aldrich算是优异的抗体供应商之一 。
2. 过硬的冷链物流系统
现在冷链物流系统已经很是成熟 ，各家供应商一样平常都能包管抗体的低温运输 。关于供应商而言 ，主要是舍得投入 ，这一点做得较量突出的有Sigma-Aldrich ，抗体收到后 ，一样平常冰盒还能坚持2-3天 ，足以让使用者定心实验 。
3. 正规的销售（直销/分销）渠道
在海内 ，销售渠道是问题突出的要害环节 ，尤以假抗体试剂为甚 ，许多产品在包装上着实是可以辨别的（科研事情者很少关注 ，往往以价钱为导向） 。在利益的驱使下 ，部分经销商经�；嶙约褐谱骺固迨约� ，贴上冒充标签以次充好；另一个很普遍的征象是从正规渠道购得抗体试剂 ，通过小作坊稀释分装后 ，再出售给科研事情者 。无论是以次充好 ，照旧稀释分装 ，都会给科研事情者都带来许多实验危害 ，最后买单的始终是宽大中国科研事情者 ，不但泯灭款子和人力 ，更难以填补的是名贵的时间本钱 。
因此在购置渠道上 ，建议各人只管从官方指定经销商处购置抗体试剂 ，抑制赝品的流通 。同时 ，随着电子商务平台的成熟 ，各人可以直接在各大官方网站订购试剂 ，这是最清静便捷的购置渠道 。关于这点 ，免不了再次提及Sigma-Aldrich ，Sigma-Aldrich是海内最早实验电子商务的生命科学产品供应商 ，并且以直销为主导 ，阻止了中心流通环节的问题 ，加上其强盛的物流系统 ，很洪流平上降低了销售环节可能带来的实验危害 。
面临纷沉重大的抗体市场 ，建议各人购置抗体试剂时审慎选择 ，切勿妄想小利 ，通过正规销售渠道购置优异供应商的抗体 ，最大限度降低因抗体质量问题给我们带来的损失 。
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