新要领直接测定药物的靶点停留时间
药物治疗的条件是它们与细胞靶点的物理连系。这种连系的测定往往是在体外举行，无法充分模拟细胞内的重大情形。Promega的科学家克日开发出一种新要领，可直接评估活细胞内靶点作用的动态历程。这项效果于克日揭晓在《Nature Communications》期刊上。
阐释小分子调理剂怎样与细胞内的靶点连系，对相识药理机制十分要害。除了靶点作用（target engagement）的特异性和亲和力，非平衡条件的连系动力学也决议了候选药物的治疗潜力。这些参数通常是通过生化要领来评估的，但无法充分模拟细胞内的重大性。出于这个缘故原由，制药行业一直希望在完整细胞内评估靶点作用。
Promega的科学家使用NanoLuc手艺开发出一种新要领，可测定活细胞中的靶点停留（target residence），作为靶点作用的主要方面。这种手艺使用生物发光共振能量转移（BRET），允许实时测定活细胞内药物与卵白靶点的连系。
为了检测药物-靶点的相互作用，NanoBRET手艺接纳细胞通透性的荧光示踪剂，旨在与NanoLuc标记的卵白靶点相互作用。这种相互作用的效果是NanoLuc卵白的能量转移到示踪剂上，爆发一种可丈量的信号。
若是小分子候选药物与卵白靶点相互作用，示踪剂就需要和药物竞争，这样BRET信号削弱。药物停留时间的测定依赖于化合物的预平衡、过量化合物的去除，以及示踪剂的添加。实时信号监测显示，缓慢解离的化合物阻碍示踪剂的连系，使得BRET信号缓慢爆发。
直接测定靶点作用
在药物开发历程中，测定细胞中卵白靶点与药物的连系并将这种靶点作用与药理作用相关联是十分主要的。NanoBRET手艺为直接评估靶点作用提供了一种简朴的要领。英国癌症研究中心曼彻斯特学院的Graeme Walker体现：“NanoBRET系统让我能够在活细胞中直接测定抑制剂的作用，我很期待将这种手艺应用到其他靶点。”
测定靶点停留时间
NanoBRET手艺一个更大的利益在于能够测定靶点停留时间，这是药物与卵白相互作用的一连时间。这让研究职员能够优化药物，以便增强作用。Walker增补说：“NanoBRET手艺在坚持细胞完整的同时，接纳一种简朴的要领来测定化合物的停留时间。这种能力让我们团队能够阐释探针的新作用机制。”
NanoBRET手艺是对BRET的大幅改良。它使用NanoLuc? 萤光素酶作为能量供体，而HaloTag? 卵白标记的NanoBRET? 618荧光基团作为能量受体，特殊适合细胞水平卵白相互作用的研究。
分享到：
相关新闻
