卵白表达效劳先容

2015-07-27

会见量：

尊龙凯时卵白表达效劳优点是实验周期短、本钱低、产量高。卵白表达是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因卵白的一种分子生物学手艺。在基因工程手艺中占有焦点职位。

主要方法：大肠杆菌表达系统、酵母表达系统、昆虫细胞表达系统、哺乳动物细胞表达系统、植物细胞表达系统

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卵白表达与纯化（1）

主要表达系统先容：

1、原核表达系统：将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大宗卵白质的要领一样平常称为原核表达。这种要领在卵白纯化、定位及功效剖析等方面都有应用。

尊龙凯时科研职员建设了成熟的大肠杆菌表达及纯化效劳平台，提供包括种种重组卵白以及其复合物在大肠杆菌中的表达与纯化效劳。

效劳项目：

重组质粒构建；

重组表达测试；

可溶性表达条件测试；

小规模卵白表达和纯化（2L作育基作育产品）；

大规模卵白表达和纯化（10L以上）。

原核表达一样平常程序：获得目的基因=》准备表达载体=》将目的基因插入表达载体中（测序验证）=》转化表达宿主菌=》诱导靶卵白的表达=》表达卵白的剖析=》扩增、纯化、进一步检测。

优点：原核卵白表达系统既是最常用的表达系统，也是最经济实惠的卵白表达系统。原核卵白表达系统以大肠杆菌表达系统为代表，具有遗传配景清晰、本钱低、表达量高和表达产品疏散纯化相对简朴等优点；

弱点：主要是卵白质翻译后缺乏加工机制，如二硫键的形成、卵白糖基化和准确折叠，获得具有生物活性的卵白的几率较小。

2、酵母表达系统：酵母表达系统作为一种后起的外源卵白表达系统，由于兼具原核以及真核表达系统的优点，正在基因工程领域中获得日益普遍的应用，应用此系统可高水平表达卵白，且具有翻译后修饰功效，故被认可为一种表达大规模卵白的强有力的工具。

尊龙凯时科研职员建设了成熟的酵母表达纯化效劳平台，提供优质的重组卵白在毕赤酵母和酿酒酵母中的表达与纯化效劳。

效劳项目：

重组酵母表达质粒构建；

重组质粒电转化；

重组表达子筛��；

小规模卵白表达和纯化（2L作育基作育产品）；

大规模卵白表达和纯化（10L以上）。

优点：酵母卵白表达系统以甲醇毕赤酵母为代表，具有表达量高，可诱导，糖基化机制靠近高等真核生物，渗透卵白易纯化，易实现高密发酵等优点。

弱点：为部分卵白产品易降解，表达量不可控。

3、哺乳动物细胞和昆虫细胞表达系统：哺乳动物细胞表达外源重组卵白可使用质粒转染和病毒载体的熏染。使用质粒转染获得稳固的转染细胞需几周甚至几个月时间，而使用病毒表达系统则可快速熏染细胞，在几天内使外源基因整合到病毒载体中，尤其适用于从大宗表达产品中检测出目的卵白。

优点：是卵白翻译后加工机制最靠近体内的自然形式，最容易保存生物活性。

弱点：是表达量通常较低，稳固细胞系建设手艺难度大，生产本钱高。

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